关于土壤中放线菌的分离的介绍

生活作者 / 骚皮 / 2025-09-08 16:52
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1.用三种培养基培养,分别是牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养、分离)、马铃薯葡萄糖培养基(真菌培养),高氏1号培养基(放线菌)

2.培养一定时间,待菌长出,根据三种菌的菌落特点,选取菌种,用划线法接种到各种菌对应的斜面培养基上,培养。

3.进行生化实验,确定是否是你猜想的菌。三种菌的生化实验具体我也不是很清楚。

如果觉得还满意,请采纳。谢谢!

土壤中抗生素产生菌的筛选注意事项

1、牛肉膏蛋白胨培养基。(分离出各种细菌、放线菌。)

这是一种应用十分广泛的天然培养基,其中的牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,而NaCl提供无机盐

牛肉膏 0.3g

蛋白胨 1g

氯化钠 0.5g

琼脂 2g

自来水 100mL

pH 7.0~7.2

灭菌 1.05kg/cm2,22min

配制具体步骤

1.称量

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。

2.溶化

在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。

3.调pH

在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。反之,则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。

对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有关说明书)。

4.过滤

趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去(本实验无需过滤)。

5.分装

按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。

(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

6.加塞

培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。

7.包扎

加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

8.灭菌

将上述培养基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃, 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。

9.搁置斜面

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

10.无菌检查

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否彻底。

注意温度和湿度还有环境。

菌种分离首先是从土壤或腐生植物中收集含菌样品,用无菌水稀释后,中收集含菌样品,用无菌水稀释后,涂布于置有适宜细菌、涂布于置有适宜细菌、放线菌或霉菌生长的琼脂培养基平皿上,菌生长的琼脂培养基平皿上,并将其倒置于恒温箱中,培养一定时间,其倒置于恒温箱中,培养一定时间,平皿上长出的许多单个菌落(平皿上长出的许多单个菌落(单一微生物的集落)微生物的集落)经分别分离后即为各种纯种菌株,简称纯种简称纯种,移种至试各种纯种菌株简称纯种移种至试管斜面培养基上,管斜面培养基上,置4℃冰箱备用。 ℃冰箱备用。

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